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RNTEC/HL-025 大鼠正常氣管上皮細胞：特性、培養與科研應用

一、細胞基本特性

二、細胞培養與維護

1. 培養基與環境
   • 推薦培養基：采用專門的氣道上皮細胞培養基（如 SAGM 或 RNTEC 專用培養基），含胎牛血清（FBS，5%~10%）、表皮生長因子（EGF）、胰島素、轉鐵蛋白等生長因子，以及雙抗（青霉素 100 U/mL + 鏈霉素 100 μg/mL）。
   • 培養條件：37℃、5% CO?恒溫培養箱，濕度維持在 95% 以上，避免培養基快速蒸發導致 pH 值波動。
2. 傳代與凍存
   • 傳代時機：細胞融合度達 80%~90% 時進行傳代，采用 0.25% 胰酶 - EDTA 消化液（含 0.02% EDTA）消化 1~2 分鐘，待細胞變圓后及時終止消化，吹打制成單細胞懸液，傳代比例建議 1:2~1:3。
   • 凍存方法：凍存液配方為 90% FBS + 10% DMSO，按每管 1×10?~5×10?細胞密度分裝，經程序降溫盒（-80℃過夜）后轉入液氮保存，避免細胞因溫度驟變死亡。
3. 質量控制
   • 污染檢測：定期通過顯微鏡觀察培養基是否渾濁、細胞形態是否異常，結合支原體檢測試劑盒（如 PCR 法）排除微生物污染。
   • 表型驗證：通過免疫熒光或流式細胞術檢測上皮標志物（如 CK19、E-cadherin），確保細胞未發生間充質轉化（EMT）；同時檢測是否表達 Clara 細胞分泌蛋白（CC10）等氣道特異性蛋白，確認細胞來源的正確性。

三、科研應用場景

1. 呼吸系統毒理學研究
   RNTEC/HL-025 可用于評估空氣污染物（如 PM2.5、香煙煙霧提取物）、職業粉塵或化學毒素對氣道上皮的損傷機制。例如，通過檢測細胞毒性（MTT 法）、氧化應激指標（ROS 水平）或炎癥因子（IL-6、IL-8）分泌，分析有害物質對氣道屏障功能的影響。
2. 氣道疾病模型對照
   在**、慢性阻塞性肺疾病（COPD）或肺纖維化研究中，該細胞系可作為正常對照，與病理狀態下的氣道上皮細胞（如永生化的病變細胞系）進行差異分析。例如，比較正常與炎癥刺激下的緊密連接蛋白表達變化，探討氣道高反應性的分子機制。
3. 藥物遞送系統評價
   利用 RNTEC/HL-025 的單層上皮屏障特性（可通過跨上皮電阻 TEER 值評估），模擬呼吸道黏膜屏障，測試吸入型藥物（如納米顆粒、脂質體）的滲透性和生物相容性，為藥物劑型優化提供體外數據。
4. 病毒感染與宿主相互作用
   作為呼吸道病毒（如流感病毒、鼻病毒）的易感細胞模型，可研究病毒黏附、侵入及復制機制，或評估抗病毒藥物（如奧司他韋）的抑制效果。

四、局限性與注意事項

1. 特性限制：盡管通過永生化實現了無限增殖，RNTEC/HL-025 仍可能隨傳代次數增加出現輕微表型漂移（如生長速率減慢），建議傳代次數控制在 15~20 代以內，并定期進行表型驗證。
2. 種屬差異：大鼠氣道上皮與人類存在一定差異（如纖毛細胞比例、黏液分泌細胞類型），在轉化醫學研究中需結合人源細胞（如 NHBE 細胞）或動物模型（如大鼠吸入暴露實驗）綜合分析。
3. 培養細節：避免使用含 Ca2?濃度過高的培養基，以防誘導細胞分化；傳代時消化時間不宜過長，以免損傷細胞表面受體影響后續實驗（如病毒感染實驗）。

五、典型應用案例

• 案例 1：某團隊利用 RNTEC/HL-025 研究電zi煙煙霧冷凝物（CSC）對氣道上皮的毒性，發現 CSC 可劑量依賴性降低細胞活力，并通過激活 NF-κB 通路誘導 IL-8 分泌，為電zi煙的呼吸道損傷機制提供了證據。
• 案例 2：在構建氣道上皮 - 免疫細胞共培養模型時，RNTEC/HL-025 與大鼠肺泡巨噬細胞（NR8383）共培養可模擬過敏原（如塵螨提取物）誘導的 Th2 型免疫反應，用于過敏性**的早期炎癥研究。